1、操作之前首先讲一下大概原则：1、一侧引物（上/下游）尽量位于载体质粒骨架上，另一侧位于插入目的基因序列上。2、PCR产物大小不宜超过1000bp或小于200bp。3、特殊情况时，亦可选用仅扩增部分插入片段的引物对（一般不建议，须同时辅助其他验证手段）。
4、点击下方“General Settings”进入子页面，于“Product Size Ranges”敫嘹萦钻右侧对话框中输入产物bp数值范围（建议：500左右最佳。过大（>1000bp）增加PCR反应时间，太小（<150bp）不易与引物二聚体区分），可默认此页面其他参数不变
6、然后点击右上方“Pick Primers”，即可跳转至结果页面
8、最后只需要导出引物序列送公司合成